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文/李昆明
排版/kiki
为广大不孕患者解决生育问题，提高她们的就诊满意度，一直是我们生殖中心的工作目标。
为此，我们做过问卷调查，患者最关心的三个指标分别是
“报婴成功率”、“专家技术水平”和“医生护士沟通的充分性”
，排在首位的是“报婴成功率”，英文是take baby home rate，就是把孩子抱回家的几率，基本等同于活产率。这是评价助孕成功的一个终极指标，很多朋友选了这个选项，但其实不一定完全明白其含义，容易与临床妊娠率相混淆。
那我们今天就大概梳理一下助孕过程中的那些率，明明白白地去做IVF。
卵 泡 输 出 率
就是卵巢对于促排卵药物的反应性，比如有10个窦卵泡，应用药物后有8个优势卵泡发育，那卵泡输出率就是80%。
有的患者窦卵泡看上去不少，但FSH很高、AMH很低，
获 卵 率
取卵手术时，获得的卵子数作为分子，穿刺的卵泡数作为分母，算出来的就是获卵率，平均会有70-80%的获卵率。
如果获卵率特别低，要重点排查夜针有没有打好。
受 精 率
卵子取到体外以后，经过IVF（所谓“一代试管”）或者ICSI（所谓“二代试管”）方式进行受精，受精卵数量/卵子数或MII卵子数就是受精率，IVF受精率一般要达到65%以上，ICSI受精率一般要达到75%以上。
如果正常受精率小于30%，则属于受精率偏低，需要检查卵子成熟度、精子活力，下次再行体外受精时，可能要改行ICSI或者卵子激活（ICSI受精完全失败者）。
卵 裂 率
就是胚胎形成率，分裂成胚胎的受精卵数量/所有的受精卵数量就是卵裂率，一般在95%以上，
但并非每个胚胎都可用，得再根据胚胎质量进行分级，就是下面的可用胚胎率和优质胚胎率。
可利用胚胎率和优质胚胎率
顾名思义，可用胚胎率就是有可用价值的胚胎数量/所有胚胎数量，优质胚胎率就是优质胚胎数量/所有胚胎数量。
优质胚胎的评价多采用形态法，也就是看胚胎颜值，长得漂亮、细胞均匀度好、碎片率低的评分高，
与胚胎真实的发育能力成正相关但不完全吻合，
所以，那些长得丑但其实有才能的胚胎得通过囊胚培养来证明自己的实力。囊胚形成率
优质分裂期胚胎的囊胚形成率可达到50%，但非优质分裂期胚胎的囊胚形成率只有10-20%，
一旦形成囊胚，虽然还会进行分级，但只要达到冷冻标准的胚胎，都是有潜力的，
不要忽视一个4BC或者4BB囊胚，
不信的话，去看看云南系的大理和勐勐就晓得啦。着床率
是指每个胚胎的着床能力，分裂期胚胎的着床率在35%左右，囊胚的着床率在45-50%左右，就像撒种子，
不是每一颗都有种植的能力。
临床妊娠率
多数指每移植周期妊娠率，做胚胎移植的患者，成功临床妊娠（B超看到孕囊、胚芽）的患者数量/所有接受移植的患者数量，根据移植胚胎的种类（分裂期胚胎、囊胚）和数量（1-3个，上海最多移植2枚胚胎），这个率从35-70%不等。
持 续 妊 娠 率
指除外胚胎丢失（流产、宫外孕等）后继续妊娠的患者数量/所有接受移植的患者数量。
活 产 率
最终活产分娩数量/移植周期数量，也就是孕妇最终能够成功分娩活产新生儿的比例，这个数据最最重要，与移植胚胎的种类和数量也是密切相关。
即使临床妊娠率很高，但如果胚胎丢失率太高，持续妊娠率会下降，最终活产率也会受到影响。
全球范围角度而言，活产率在30-40%。
一次说了这么多率，好多朋友搞明白了，也肯定也有不少朋友更迷糊了。
没关系，只要了解如下这一点就行了：
我们科普这些数据的意义就想告诉你，试管是由一环扣一环的率组成的，成功生下一个孩子真的是很不容易的一件事。
做试管一定程度上而言是在撞大运（各种率），但又不完全是碰运气，负责的医生会根据你的药物反应、具体情况去调整方案，尽最大努力去提高如上的这些率，争取能帮助你们尽快地好孕！
ELISA样本制备指南及注意事项
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定义及介绍
ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附测定）是最基础的免疫学实验之一，其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本，实验操作步骤并不繁琐，但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值，从而供下一步分析所用，因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。
样本制备指南
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血清
全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20min，取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血，高血脂样品
2.血浆
抗凝剂推荐使用EDTA-Na
2，样品采集后30min内于2-8℃，1000×g离心15min，取上清即可检测。
3组织匀浆/组织全蛋白
用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10min，取上清检测。
其余方法：在分析天平（AL204型）上，称量50-100mg组织样本。在样本中加入5倍质量体积的含1%PMSF的1×PBS缓冲液；并用小剪刀等工具将组织样本剪碎（尽可能小块）。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开超声破碎仪，将超声破碎仪的功率调至25%，超声时间2s，间隔时间5s，总时间2min。放入样本，冰上超声3min。视样本匀浆情况调整总时长。超声完成后，将样本放于4℃或冰上裂解30min。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。
组织匀浆液或组织全蛋白中的蛋白浓度对于检测实验的影响至关重要，建议样本蛋白浓度至少1mg/mL以上，较低浓度蛋白的组织匀浆液有可能导致ELISA检测失败。
4.细胞提取液
贴壁细胞
用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5min后收集细胞；
悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10
6个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10min，取上清检测。注：留取20μL样本，用于后续BCA测定。
其余方法：
对于
贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。以2百万细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。
对于
悬浮细胞：离心收集细胞，以2×10
6细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成（5-10）×10
5细胞/管，然后再裂解。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。
5.细胞培养上清或其他生物体液
收集液体后于2-8℃，1000×g离心20min，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。注：因细胞培养基中的胎牛血清影响或其他生物体液中杂蛋白的影响，不建议进行BCA法测定样本蛋白含量。
实验细节与注意事项
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收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎，释放大量的过氧化物酶，会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）的酶促反应，造成检测结果的不确定性。
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样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃(3个月内检测)，避免反复冻融。在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。
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试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。
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检测样本的稀释推荐多步稀释法，常规稀释检测为血清/血浆检测稀释度为2倍、20倍、200倍；细胞上清稀释度为5倍、50倍、500倍；建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度。
对于稀释倍数比较大的检测样本，参考稀释方案如下：
稀释100倍：一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内，做100倍稀释；
稀释1000倍：两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍；
稀释100000倍：三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍；
每步稀释时取液量不少于3μL，稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀，避免起泡。
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若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。
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若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。
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某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。
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对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本，经BCA法测定样本蛋白含量后，建议进行蛋白浓度的统一化，避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差；例如，统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL，进行后续的稀释和检测。